肉的宰后嫩化核心归因于肌原植物玻纤素空间架构的危害，肌原植物玻纤素空间架构是由内源性淀粉酶淀粉水解反馈酶生物降解塑料肌原植物玻纤素和細胞骨架淀粉酶构成的。与更多的年来不停是喜爱着重的钙淀粉酶酶区别，胱天淀粉酶酶（caspases）近来被选为感欲望语录题。胱天淀粉酶酶在細胞凋亡的连接的时候起着至关根本的目的，之中caspase-3在去逝淀粉酶淀粉水解反馈中的目的是双工作方面和缜密的，往往应当进这一步理论论述研究。S-亚硝基化都可以通过调结钙保持、动能排泄、淀粉酶质生物降解塑料和細胞凋亡来调结肉嫩，收录嫩度和持水能力素质。下一步理论论述研究察觉到S-亚硝基化都可以降低依赖于线粒体的caspase-3级联反馈，这或许是肌群細胞凋亡和牛肉片的品质变换的因为。caspase-3的理论论述研究重点是是其与細胞凋亡的的关系，因此，特少有理论论述研究研究S-亚硝基化调结caspase-3的制度化。

2024年9月由苏州水产业大学专业张万刚教援拜谱生物在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱动物为该研究提供了亚硝基化淡化组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

常常主题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2025年影晌细胞：5.7

发布时间段：2024年9月

合作方标准：南京农业大学

研究探讨资料：蛋白

拜谱带来枝术：亚硝基化修饰组学

高技术自驾线路：

一、分析然而

01.Caspase-3几丁质酶

近些年尚不很清楚NO对caspase-3的缓和能力能不能归因于NO介导的S-亚硝基化，有差异 氨水浓度梯度方向的GSNO做外源性NO提供，以分析caspase-3的身体外S-亚硝基化。没想到反映，与找不到GSNO的组差距，100、200和400μM GSNO组的caspase-3活力不错消减（图1），与仍然简讯保持一致。GSNO操作消减caspase-3活力的因素因素仍尚待确立。

图1 不同于酸度的GSNO外理对caspase-3活力的损害

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化程度上

实验Caspase-3的亚硝基化层面，以体现了GSNO对Caspase-3的化学反应性。经GSNO除理后，查重到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化刚度添加（图2）。哪些导致阐明，外源性GSNO陪养可取得胜利诱骗caspase-3的离体S-亚硝基化。引人惊喜的是，在是没有GSNO产生的比组中查重到一款 细小的S-亚硝基化带，这阐明caspase-3有机会發生内源性的S-亚硝基化。显然，本实验中caspase-3的S-亚硝基化层面较高，而caspase-3的活性氧减少，这与以后的实验一样的。既使，caspase-3的特喜欢的人S-亚硝基化呈现位点尚不弄清楚，还所需进两步的探求。

图2 GSNO工作对caspase-3S-亚硝基化能力的损害

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化装饰组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。绿色符号的字段指出S-亚硝基化肽，网红符号的C指出S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3降解塑料结蛋清

结淀粉酶看做一个根本的受损人体细胞骨架淀粉酶，在长期保持肌受损人体细胞成分的成分完好性和收敛性问题起着根本用处，科研S-亚硝基化caspase-3对结淀粉酶可降解塑料的神经敏各样更具根本必要性。与Std（未用胱天淀粉酶酶-3和GSNO孵育的初期肌纤维材料板淀粉酶）组相信，0 μM GSNO组（肌原纤维材料板和caspase-3的孵育，无GSNO）的完好结淀粉酶含量取得降低了，提示卡caspase-3对结淀粉酶更具内在的淀粉酶水解反应含量。在GSNO孵育后，完好结淀粉酶的含量突出新增（P < 0.05）。除外，当GSNO盐浓度增高时，完好结淀粉酶的含量将持续调涨（P < 0.05）（图5）。一种感觉取决于，SNO体现的caspase-3以含量依赖于的方法治理和改善结淀粉酶的可降解塑料。

图5.S-亚硝基化caspase-3吸附结淀粉酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3溶解肌钙蛋清-T

肌钙淀粉酶质质-T (TnT)是原肌球淀粉酶质质控制否则腹肌收敛的细条的必不可少肌原食物纤维材料板淀粉酶质质。TnT的可化学挥发表现形式是在线论文检测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化水平下，caspase-3对TnT的可化学挥发症状如图已知6图甲中，与Std组（不含有caspase-3和GSNO的肌原食物纤维材料板）想必，caspase-3组中30 kDa TnT情节取得加强，揭示caspase-3直接参与了TnT的可化学挥发，除此以外，caspase-3与GSNO的孵育形成30 kDa TnT走低。在100和200 μM GSNO组中间无在线论文检测到清晰的差别(P > 0.05)，而当GSNO的氧化还原电位完成400 μM 时，该情节取得缩短(P < 0.05)。这么多发掘揭示了SNO掩盖的caspase-3对TnT可化学挥发的调控意义。结淀粉酶质质和TnT是caspase-3的强烈底物，而GSNO加工降底caspase-3的活力性也许形成肌原食物纤维材料板淀粉酶质质可化学挥发数量降底。综上所讲所讲，NO引诱的S-亚硝基化能够使用掩盖半胱氨酸残基来控制caspase-3的活力性，而能进三步引响其对结淀粉酶质质和TnT的淀粉酶质质蛋白质水解特性，关键在于引响牛羊肉产品。

图6. S-亚硝基化caspase- 3分解肌钙核蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本研究分析目的在于试论S-亚硝基化对caspase-3呈现语的后果举例接下来对鸡肉片肌原食物植物纤维离体可降解的后果。血清S-亚硝基化行呈现语caspase-3的半胱氨酸残基，而促使caspase-3活性酶减少，进步骤限制了其对鸡肉片肌原食物植物纤维血清的血清淀粉水解效果。

三、拜谱个人心得体会

实验所采用了酶活校正，亚硝基化呈现组学概述，WB等监测具体方法，发觉蛋清酶S-亚硝基化可能呈现caspase-3的半胱氨酸残基，这会造成了caspase-3可溶性的变低，并举两步压制了其对牛羊肉肌原玻纤蛋清酶的蛋清酶淀粉水解效率。本实验为解釋蛋清酶质亚硝基化对肉肥的控制缘由提供了没事个新的角度 。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的球营养物质组学、突显球营养物质组学、分解代谢组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸类型新产品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total被氧化还原成、散布巯基，欢迎大家咨询！

借鉴文献资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663